Впч метод гибридного захвата

Инфекция, вызываемая вирусом папилломы человека

Впч метод гибридного захвата

ВПЧ – группа распространенных и генетически разнообразных вирусов, инфицирующих и поражающих эпителий кожных покровов (кожные типы ВПЧ) и слизистых оболочек ротовой полости и аногенитальной области (генитальные типы ВПЧ).

Генитальные типы ВПЧ передаются преимущественно половым путем и через родовые пути от матери ребенку.

Основными клиническими формами папилломавирусной инфекции гениталий являются остроконечные кондиломы, а также злокачественные формы изменения эпителиальных клеток, приводящие к раку шейки матки.

Исход инфекции зависит от типа вируса. Типы ВПЧ низкого канцерогенного риска (НКР, низкоонкогенные) связаны с остроконечными кондиломами и дисплазиями легкой степени.

Типы ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР, высокоонкогенные) – 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 – наряду с остроконечными кондиломами и дисплазиями легкой степени, также индуцируют злокачественную трансформацию эпителия, приводящую к инвазивному раку.

Дифференциальная диагностика. Поражения шейки матки, влагалища, вульвы, пениса, заднего прохода непапилломавирусной этиологии; в случае остроконечных кондилом – с проявлениями, связанными с вирусом простого герпеса, а также с истинными папилломами.

Лабораторная диагностика папилломавирусной инфекции включает выявление и количественное определение ДНК ВПЧ ВКР, генотипирование ВПЧ ВКР, выявление ДНК ВПЧ НКР.

Материал для исследования

  • Соскобы эпителия цервикального канала, влагалища, вульвы, заднего прохода – для выявления, количественного определения и генотипирования ВПЧ;
  • мазки из ротовой полости и гортани – выявления ВПЧ НКР у детей.

Выявление и определение концентрации вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска

Показания к обследованию

  • Определение группы риска по развитию рака шейки матки и рака заднего прохода;
  • скрининговые программы с цитологическим исследованием одновременно или на первом этапе скрининга (до цитологического исследования) для женщин старше 30 лет;
  • разрешение неопределенных и сомнительных результатов цитологических исследований (наличие ASCUS – атипичные плоские клетки неясного значения);
  • контроль эффективности терапии тяжелой дисплазии (CIN2+) через 6 месяцев после удаления пораженного эпителия;
  • проведение дифференциальной диагностики с заболеваниями непапилломарусной этиологии.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики.  Для выявления ДНК ВПЧ ВКР используют МАНК (ПЦР, NASBA, TMA и др.) и методы амплификации сигнала (гибридный захват). Культивировать вирус не удается.

Гибридный захват является первым и наиболее охарактеризованным методом выявления ДНК ВПЧ. Применение метода позволяет определять концентрацию вируса в условных единицах оптической плотности, линейный диапазон небольшой (3–4 порядка).

Образцы, в которых присутствует вирус в концентрации ниже порога клинической значимости, учитываются как отрицательные. Граница клинической значимости определяется путем тестирования эталонного образца (концентрация ДНК ВПЧ 1 пг/мл). Все сигналы, значения которых ниже эталонного, считаются отрицательными.

Более современными, быстрыми и удобными для использования являются методы на основе АНК. МАНК, работающие в неколичественном формате, выявляют либо ДНК вируса (ПЦР, HDA и др.), либо мРНК транскрипты онкогенов E6 и E7 ВПЧ (NASBA, TMA).

Для выявления только клинически значимых концентраций (по разным методикам учета – более 1 пг/мл или 1000 копий ДНК вируса на 100000 клеток человека) используют методики с чувствительностью, при которой образцы с низкой концентрацией учитываются как отрицательные.

Наиболее целесообразно использовать ПЦР в реальном времени, которая позволяет точно определить концентрацию ДНК вируса. На основе полученных данных проводится не только оценка концентрации вируса, но, что важно, проводится градация результата по клинической значимости полученной концентрации на:

  • положительный – выше порога клинической значимости;
  • положительный – малозначимый (ниже порога значимости);
  • отрицательный.

Различные наборы реагентов могут отличаться спектром выявляемых генотипов. К группе ВПЧ ВКР относятся 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 генотипы. Наиболее канцерогенными считаются 16 и 18 типы, наименее – 51, 56, 68.

Для РФ и стран СНГ клинический смысл исследования сохраняется только при определении как минимум 10 генотипов из перечисленных выше.

Выявление в смеси генотипов низкого или неустановленного риска существенно снижает специфичность выделения группы риска онкологической патологии и не может быть оправдано.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Для проведения скринингового обследования на наличие предрака и рака шейки матки предпочтительным является использование мазков/соскобов эпителия цервикального канала и зоны трансформации, выполненных цервикальными цитологическими щеточками. Допускается использование для этих целей мазков из влагалища.

Для скрининга рака шейки матки все тесты, вне зависимости от выбранной технологии, должны иметь сбалансированные аналитические и диагностические характеристики, удовлетворяющие следующим условиям – не менее 98% чувствительность по отношению к CIN2+ и не менее 90% специфичность относительно широко валидированного в скрининге теста (например, Hybrid Capture II).

Для достижения оптимума аналитической чувствительности избирают подход отсечения образцов с концентрацией ДНК ВПЧ ниже порога клинической значимости. Для этого либо проводят искусственное снижение аналитической чувствительности, либо выбирают в качестве референтного контрольный образец с требуемой пороговой концентрацией.

Предпочтительным является измерение концентрации ДНК ВПЧ методом ПЦР в реальном времени.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Обнаружение ДНК ВПЧ в любой концентрации свидетельствует о наличии возбудителя, однако при интерпретации результатов тестирования следует учитывать, что более 80% инфицированных спонтанно излечиваются в течение 12–24 мес. Опасность представляет персистентная форма инфекции (сохраняющаяся более 12–24 мес.).

Однократный положительный результат надежно указывает на принадлежность к группе риска развития рака шейки матки в случае, если исследование проводится в группе женщин старше 30 лет или вступивших в половую жизнь более 6–7 лет назад. Особая настороженность должна быть проявлена в отношении пациенток, у которых подтверждается персистенция вируса при повторном тестировании через 1 год.

При скрининге с использованием количественных тестов принимают во внимание только клинически значимый результат. Для дифференциальной диагностики и наблюдения пациентов после проведения лечения дополнительная ценность одиночного количественного определения не показана.

Перспективным в прогнозе риска рецидива CIN2+ является оценка динамики вирусной нагрузки после лечения (снижение или увеличение концентрации вируса).

Генотипирование вирусов папилломы человека.  Цель генотипирования ВПЧ – отличие персистирующей инфекции от случая повторного инфицирования (сохранение генотипа в повторных тестах); уточнение тактики ведения больных в зависимости от онкогенности выявленных типов вируса.

Показания к обследованию. Пациенты с выявленной папилломавирусной инфекцией ВКР

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Для генотипирования ВПЧ используют МАНК. Распространение получили методики с детекцией продуктов амплификации методом электрофореза (генотипирование по величине амплифицируемого фрагмента), гибридизации на плашках и стрип-полосках, ПЦР в реальном времени.

Классические методики, использующие принцип гибридизации со специфическими зондами позволяют определять наиболее широкий спектр генотипов (20–40). Однако использование для амплификации универсальных праймеров приводит к существенным различиям в аналитической чувствительности выявления различных генотипов ВПЧ, приводя к заметным искажениям результатов.

Кроме того, широкий спектр определяемых генотипов необходим только для научных исследований. В клинической практике достаточным может считаться генотипирование ВПЧ ВКР (10–13 типов).

Методики, основанные на применении типоспецифических олигонуклеотидов, позволяют проводить типирование спектра клинически значимых генотипов и в заметной степени лишены проблемы различий аналитической чувствительности по отношению к разным генотипам ВПЧ.

Предпочтение должно отдаваться мультиплекс-методикам с использованием ПЦР в реальном времени как наиболее быстрым, контаминационно безопасным, предполагающим возможность автоматизации. Может проводиться сокращенное генотипирование с выявлением только наиболее онкогенных типов ВПЧ 16 и 18.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Для установления персистенции вируса применяют подход повторного генотипирования через 12 месяцев.

Персистенция подтверждается при сохранении генотипа/ генотипов при повторном исследовании, полная смена спектра генотипов указывает на излечение и повторное инфицирование альтернативными ВПЧ.

Выявление наиболее онкогенных типов ВПЧ (16 и 18) может указывать на потребность в более агрессивной тактике ведения больных (более частые повторные визиты, более тщательное обследование для выявления предраковых изменений и др.).

Выявление вирусов папилломы человека низкого канцерогенного риска

Показания к обследованию

  • Определение группы риска развития папилломатоза гортани у ребенка (беременные и новорожденные);
  • дифференциальная диагностика с заболеваниями непапилломавирусной этиологии.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики.  Для выявления ДНК ВПЧ НКР используют МАНК (ПЦР, NASBA, TMA и др.) и методы амплификации сигнала (гибридный захват). Предпочтение должно отдаваться быстрым и контаминационно-безопасным методикам, таким как ПЦР в реальном времени.

Клинически оправданным является определение двух генотипов 6 и 11 (более 90% случаев папилломатоза гортани у детей). Некоторую дополнительную ценность имеет выявление 42, 43 и 44 генотипов. Количественное определение не оправдано.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Выявление 6 и/или 11 генотипов указывает на возможный риск развития папилломатоза гортани у ребенка (риск повышается, если вирус обнаружен в гортани). При планировании беременности может быть рекомендована выжидательная тактика.

При сопутствующем наличии остроконечных кондилом – их лечение методом химической и/или физической деструкции. При наличии беременности ее прерывание или родоразрешение методом кесарева сечения не оправданы, так как риск развития папилломатоза гортани ниже риска возможных осложнений указанных операций.

Источник: https://www.cmd-online.ru/vracham/spravochnik-vracha/infektsiya-vyzyvaemaya-virusom-papillomy-cheloveka/

ПЦР-тестирование на вирус папилломы человека(ВПЧ)

Впч метод гибридного захвата

Некоторые типы ВПЧ (всего их более 100) несут в себе канцерогенные свойства, то есть при определенных условиях способны провоцировать рост злокачественных опухолей. Вирус папилломы после проникновения в организм проявляется не сразу, он годами может нести скрытую угрозу здоровью человека. Вовремя выявить и предупредить развитие онкологических процессов поможет ВПЧ тестирование.

Что такое, и каким бывает тест на ВПЧ

Тест на ВПЧ – это исследование биоматериала взятого из цервикального канала, шейки матки (у женщин) или уретры (у мужчин). Проведенный анализ опровергает или подтверждает присутствие возбудителя, позволяет определить его тип, а также количество (вирусную нагрузку) в исследуемом материале.

Однократно проводить тестирования на ДНК ВПЧ рекомендуют всем без исключения лицам до 30 лет. Если результат анализа положительный (выявлено наличие возбудителя), врач назначает дополнительные диагностические мероприятия. Если же папилломавирус не обнаружен, профилактические обследования проводят каждые 3 года.

На сегодняшний день ВПЧ тест можно провести несколькими способами:

  • Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – расширенный тест, выявляет наличие возбудителя, его тип и вирусную нагрузку;
  • Дайджен-тест – иное название «метод гибридного захвата». Эта дифференциальная диагностика вирусов с высоким онкогенным риском (определяется тип и концентрация возбудителя);
  • ПАП-тестирование – по сути это обычный цитологический анализ мазка по Папаниколау позволяющий определить наличие нетипичных клеток шейки матки (на сегодняшний день его удалось расширить и сделать более информативным);
  • ВПЧ ПАП тест расширенный – совокупность двух исследований (ВПЧ-тест + цитологический анализ Папаниколау). Выявляет тип и количество вируса, а также наличие клеточных аномалий;
  • Впч пап-тест жидкостный – это два исследования объеденные в одно. Здесь также выполняют тест на ВПЧ и делают цитологический забор, однако биоматериал помещают в специфическую жидкую среду, это позволяет провести более глубокое тестирование.

Важно! Важным этапом при диагностике является правильный забор биоматериала – недостаточное присутствие геномной ДНК пациента в исследуемой жидкости может дать ложный результат. Поэтому для достоверности тестирования был внедрен специальный параметр КВМ – контроль взятия материала.

Читать ещё  Вирус папилломы человека(ВПЧ) 16 и 18 типа у мужчин

ПЦР-тестирование

Для проведения ПЦР-диагностирования подходит любая биологическая жидкость пациента – влагалищные или уретральные выделения, сперма, моча. Стоимость исследования варьирует от 700 до 1500 рублей (наиболее затратным является определение сразу нескольких высоко онкогенных типов ВПЧ). Результаты, как правило, готовы на 3 – 5 день после забора биоматериала.

Для получения достоверных результатов ПЦР-анализ проводят в середине менструального цикла (не раньше чем через 5 дней после и не позднее, чем за 5 дней до начала месячных). Забор биоматериала не проводят:

  • В период менструации;
  • В течение 2 суток после полового акта;
  • В течение 2 суток после применения вагинальных препаратов с содержанием жира, а также уксусных растворов, тампонов;
  • После спринцевания;
  • После кольпоскопии или вагинального УЗИ органов малого таза.

Также мазок не берется на протяжении 2 недель после применения местных антибактериальных и антисептических препаратов (после приема системных антибиотиков должно пройти не меньше 1 месяца). Мочеиспускание проводят не позднее, чем за 2 часа до взятия мазка из уретрального канала (это касается в основном мужчин).

Для выявления папилломавируса существует 4 методики ПЦР:

  • Качественный формат – показывает факт наличия вируса в организме;
  • Генотипирование – выполняют для определения типа ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР);
  • Количественный формат – определение вирусной нагрузки (концентрация возбудителя в изучаемом материале);
  • Комбинированный метод – это качественный формат + генотипирование.

Результат анализов приходит через несколько дней, их расшифровка это прерогатива врача. Однако в качестве ознакомительной информации мы расскажем, как интерпретировать обозначения:

  • Lg5,0 – высокая вирусная нагрузка.

На основании полученных данных врач назначает максимально эффективную терапию.

Digene-тест

Дайджен или как его еще называют Дайджест-тест разработала компания Digene Diagnostics (отсюда название). В качестве исследуемого материала для анализа на ВПЧ берут соскоб из влагалища, цервикального канала, уретры. При исследовании определяют ДНК-фрагменты вируса, его тип и количественное соотношение.

Это наиболее чувствительный и точный тест (ошибки практически исключены), как правило, его применяют для выявления одного или нескольких канцерогенных типов ВПЧ способных привести к дисплазии и раку шейки матки.

Несмотря на то, что Digene-тест достаточно информативный его следует дополнять другими скрининговыми исследованиями – цитологией, кольпоскопией, ПЦР-диагностикой, ПАП-тестированием.  Золотым стандартом медицины считается Дайджен-тест + цитологическое исследование. Комплексное обследование позволяет получить развернутый результат, на основе которого врач уже будет назначать лечение.

Какой-либо специфической подготовки перед проведением тестирования не требуется, достаточно выполнить обыкновенную гигиеническую процедуру (спринцевания исключены). Время проведения дайджен-теста от 7 до 14 дней.

Впч пап-тест

ПАП-тест проводят при каждом гинекологическом осмотре – берется мазок из влагалища, внешней поверхности и канала шейки матки. Цитологический анализ по Папаниколау показывает наличие нетипичных клеток с высоким риском перерождения в онкологические опухоли. Однако этого не достаточно, ведь для адекватного лечения необходимо знать также генотип возбудителя и его количественное отношение.

Поэтому сегодня проводят расширенные тесты, включающие в себя несколько исследований.

  • Впч пап-тест – совокупность расширенного исследования на ДНК ВПЧ и цитологию. В ходе анализа определяют серотип вируса, степень его канцерогенности и количественную нагрузку. Также проводят изучение цервикального соскоба на наличие онкопатологий шейки матки по Папаниколау – взятый мазок переносят на стекло, окрашивают специальным красящим веществом и изучают под микроскопом. Цена исследования от 2100 рублей;
  • Впч пап-тест жидкостный (расширенный) – эта также объединенная методика включающая определение генотипа, вирусную нагрузку и степень онкогенности. В ходе анализа выполняют цитологическое исследование по Папаниколау для выявления онкопатологий, только забранный биоматериал помещают в специальную жидкостную среду. Это новая технология позволяющая снизить количество неадекватных соскобов и более точно выявить эпителиальные изменения, определить неоплазию, дисплазию или онкологию шейки матки. Стоимость анализа от 2000 рублей.

Такой инновационный подход позволяет провести сразу несколько исследований, взяв при этом один соскоб. Результаты анализов пациент получает спустя 3-7 дней после забора биоматериала.

Читать ещё  Препарат “Изопринозин” от вируса папилломы человека(ВПЧ)

Интерпретируют жидкостный ПАП-тест следующим образом (по системе Бетезда):

  • NILM – отклонений нет, мазок нормальный;
  • ASCUS – выявлено присутствие нетипичных клеток;
  • ASC-H – обнаружен плоскоклеточный эпителий (свидетельствует о начальной степени рака);
  • LSIL – нетипичные клетки в малой концентрации (возможна начальная стадия дисплазии, ВПЧ);
  • HSIL – высокая концентрация атипичных клеток указывающая на развитие онкопатологии;
  • AGS – изменение железистого эпителия (указывает на дисплазию или онкопатологии);
  • AIS – начальная стадия онкологического процесса;
  • High-grade SIL – выявлен плоскоклеточный рак.

Важно! ПАП-тест проводят всем без исключения женщинам после начала половой жизни. Метод безболезненный, несложный однако достаточно информативный для того чтобы на ранней стадии выявить эпителиальные изменения шейки матки и предотвратить онкологические процессы.

Анализ в домашних условиях

Женщинам, которые по разным причинам не могут посетить врача, но желают сделать анализ на ВПЧ могут провести экспресс-тест самостоятельно просто в домашних условиях.

Чтобы провести исследование достаточно купить в аптеке специальный набор, но при этом нужно соблюдать некоторые правила по забору биоматериала:

  • Не проводить тест во время менструации (для взятия мазка подойдет середина цикла);
  • Перед забором нельзя спринцеваться;
  • За 2-3 дня до анализа не использовать никакие вагинальные медикаменты.

Экспресс-тест проведенный самостоятельно не является методом диагностики, это профилактический анализ, который побуждает женщину в случае положительного результата обратиться к врачу и предотвратить возможное развитие онкологии.

Не следует проводить тестирование в домашних условиях на поздних сроках беременности (особенно если имеются осложнения или угроза прерывания). Отказаться от самостоятельного ВПЧ-анализа следует девушкам, не вступавшим в сексуальные отношения, а также лицам в недавнем времени прошедшим антибиотикотерапию.

Любые анализы лучше проводить в специализированном учреждении – для цитологического исследования достаточно посетить гинеколога, а вот расширенные ВПЧ тесты выполняют в медицинских или лабораторных центрах.

в тему

Источник: https://zemlvetl.info/pcr-testirovanie-na-virus-papillomy-cheloveka-vpch.html

Human Papillomavirus низкого канцерогенного риска (6, 11, 42, 43, 44), Digene-тест

Впч метод гибридного захвата

[09-178] Human Papillomavirus низкого канцерогенного риска (6, 11, 42, 43, 44), Digene-тест

6195 руб.

Выявление в исследуемых образцах вирусов папилломы низкого канцерогенного риска – указывающих на низкий риск развития рака (вызывают кондиломы на половых органах, папилломатоз дыхательных путей); проводится посредством Digene HPV теста – высокочувствительный тест, современная молекулярная технология, направленная на выявление специфических фрагментов ДНК вируса папилломы человека (метод “гибридного захвата”).

Выдается общий по всем перечисленным типам результат (положительный/отрицательный) с полуколичественной оценкой, без деления на типы.

Синонимы русские

Папиллома-вирусы человека низкого канцерогенного риска, вирусы папилломы человека низкого канцерогенного риска, ВПЧ низкого канцерогенного риска, Дайджен-тест, Дайджест-тест, ВПЧ digene-тест.

Синонимыанглийские

Papillomavirus hominis, 6, 11, 42, 43, 44 types.

Метод исследования

Гибридный захват.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок смешанный из цервикального канала и поверхности шейки матки.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Вирусы папилломы человека (ВПЧ) широко распространены, поражают эпителий кожи и слизистых оболочек и обладают онкогенным потенциалом. ВПЧ передаётся при тесном контакте с инфицированным эпителием, поэтому основные пути заражения – половой и контактно-бытовой. Возможна передача ВПЧ от инфицированной матери к плоду. Человек может быть инфицирован несколькими типами ВПЧ.

К факторам, провоцирующим развитие ВПЧ-инфекции, относятся ранее начало половой жизни, большое количество половых партнеров, сниженный иммунитет, применение оральных контрацептивов, авитаминозы, инфекции, передаваемые половым путём, курение и проживание в крупных городах.

Инкубационный период может длиться от 2 месяцев до 2-10 лет. Характерно скрытое течение заболевания, при котором отсутствуют клинические проявления, а при кольпоскопическом, цитологическом и гистологическом обследовании выявляется норма. В 30 % случаев в течение 6-12 месяцев может произойти избавление от вируса.

Рак шейки матки занимает третье место в структуре заболеваемости женщин России злокачественными новообразованиями. В большинстве случаев, в 90%, онкологический процесс представлен плоскоклеточной карциномой, реже другими гистологическими вариантами (аденокарцинома и аденоплоскоклеточная карцинома).

С его развитием ассоциированы вирусы папилломы человека высокого онкогенного риска. Низкоонкогенные штаммы ВПЧ способны вызывать не такое опасное, но очень неприятное заболевание – остроконечные кондиломы. Они обладают невысоким онкопотенциалом, связаны с низким риском возникновения рака.

ВПЧ низкого канцерогенного риска – группа вирусов, которая приводит к доброкачественным поражениям, представлена 5 генотипами, но основными являются 6 и 11, которые составляют до 90% всех случаев инфицирования данными вирусами.

Наиболее частые клинические проявления – это остроконечные кондиломы (Condylomata acuminata).

Выделяют разновидности остроконечных кондилом: кератотические бородавки с локализацией на сухой коже, папулезные бородавки с локализацией на полностью ороговевшем эпителии, гигантская кондилома Бушке – Левенштейна (встречающаяся у больных со сниженным клеточным иммунитетом или при беременности). Эндоуретральные кондиломы локализуются в уретре, часто сочетаются с обычными кондиломами и встречаются преимущественно у мужчин. Кондиломы шейки матки часто сочетаются с генитальными кондиломами: экзофитные кондиломы, эндофитные (плоские).

Путь передачи ВПЧ “низкого риска” – половой. Риск передачи при контакте с инфицированным партнером – около 60%. От момента инфицирования до появления кондилом могут пройти месяцы или годы, поэтому определить момент инфицирования невозможно.

Инфицированный человек может заразить своего партнера, даже если у него/нее в данный момент нет кондилом.

Доказано, что использование презервативов помогает избежать передачи аногенитальных бородавок, однако при появлении разрастаний в областях, не защищенных презервативом, заражение возможно.

Женщинам, у которых обнаружены папилломы, не нужно чаще, чем другим, делать PAP-тест (мазок из канала шейки матки, который выявляет ранние поражения (дисплазия/предрак), а также рак шейки матки).

К тому же заражение ВПЧ низкого риска не всегда приведет к образованию папиллом.

Однако даже при отсутствии каких-либо признаков заболевания человек может выделять вирус и заражать своих половых партнеров.

При выявлении типичных папиллом диагноз может быть поставлен сразу, проведение биопсии необязательно. Дополнительные исследования нужны, если у врача есть подозрения на предраковые заболевания (кровоточивость, пигментация папиллом и т.д.

) или рак влагалища/вульвы.

Эти заболевания далеко не всегда связаны с ВПЧ, однако могут приводить к появлению разрастаний, напоминающих папилломы (кровоточивость, пигментация, а также результаты кольпоскопии помогут заподозрить более серьезное заболевание).

Анализ на ВПЧ 6 и 11 типов при выявлении аногенитальных бородавок малоинформативен (результат не повлияет на тактику лечения), в связи с чем не рекомендуется к рутинному использованию в клинической практике. Так как ВПЧ относится к ИППП, при обнаружении кондилом необходимо пройти обследование и на другие ИППП.

Digene HPV тест – специально разработанная молекулярная технология, направленная на выявление специфических фрагментов ДНК вируса папилломы человека (метод “гибридного захвата”).

Он позволяет дифференцировать 2 группы генотипов вируса – высокого (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) и низкого онкориска (6, 11, 42, 43, 44). В ходе данного исследования выявляются вирусы 5 штаммов, которые имеют низкий риск.

В качестве исследуемого материала для анализа берут мазок из цервикального канала, поверхности шейки матки.

Это очень высокочувствительный и точный тест (ошибки практически исключены) при выявлении канцерогенных типов ВПЧ, что позволяет достоверно определить степень риска развития рака шейки матки. Дайджест-тест определяет клинически значимую концентрацию вируса. Считается целесообразным его проведение при неопределенных результатах PAP-теста.

Для чего используется исследование?

  • Для выявления степени риска развития рака шейки матки.

Когда назначается исследование?

  • При дифференцировании между 2 группами генотипов вируса – высокого и низкого онкориска.
  • При неопределенных результатах PAP-теста.

Что означают результаты?

Референсные значения

Отношение S/CO (signal/cutoff): 0 – 0,81.

Результат: отрицательный.

Выдается общий по всем типам результат, без деления на типы.

Отрицательный результат

Указанных генотипов вируса в исследуемом материале нет.

Положительный результат

Положительный результат у женщин моложе 30 лет служит показанием к повторному тестированию через 9 месяцев, поскольку у молодых женщин инфекция ВПЧ может носить транзиторный характер.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Акушер-гинеколог, дерматовенеролог, уролог, инфекционист, проктолог, педиатр, ЛОР.

Литература

  • Папиллома-вирусная инфекция урогенитального тракта женщин (эпидемиология, клинико-патогенетические особенности, методы диагностики, лечение, профилактика): информационно-методическое пособие / Е. В. Фоляк, Т. М. Соколова, К. Ю. Макаров, А. В. Якимова, В. Р. Мухамедшина, А.В . Усова. – Новосибирск : Вектор-Бест, 2010. – 88 с.
  • Кулаков В. И., Прилепская В. Н. Профилактика рака шейки матки : руководство для врачей. – М. : МЕДпресс-информ, 2008. – 56 с.
  • Bonnez W., Reichman R.C. Papillomaviruses. In: Principles and practice of infectious disease / G.L. Mandell, Bennett J.E., Dolin R (Eds) ; 6th ed. – Churchill Livingstone, Philadelphia, PA 2005. – 2701 p.
  • Garcea R. L. The papillomaviruses / R.L. Garcea, D. DiMaio. – Springer, 2007. – 419 p.

Источник: https://helix.ru/kb/item/09-178

Молекулярно-биологические методы диагностики ВПЧ-инфекции

Впч метод гибридного захвата
Раку шейки матки на протяжении нескольких лет предшествуют предраковые поражения, которые именуются CIN-интраэпителиальными цервикальными неоплазиями трех степеней.

СIN I не является предраком и имеет высокую степень регрессии, однако при наличии вируса ВПЧ CIN с высокой вероятностью переходит в CIN II и CIN III, истинные предраковые поражения.



Существует широкий спектр методов диагностики рака шейки матки и предраковых поражений: 

  • клинические;
  • цитологические (Pap-test);
  • расширенная кольпоскопия;
  • определение ДНК ВПЧ с помощью ПЦР в режиме реального времени;
  • определение вирусной нагрузки ВПЧ с помощью Digene-тест;
  • жидкостная цитология;
  • морфологическое исследование;
  • онкомаркёры: определение онкобелков p16, ki67, mcm2, mcm7, Hsp27 и др;
  • сканирование шейки матки в режиме реального времени (TruScreen).

Тестирование на ДНК ВПЧ относится к молекулярно-биологическим методам, используется в дополнении к цервикальному скринингу у женщин, начиная с 30-летнего возраста, а также в качестве сортировочного теста при неясных результатах цитологических исследований.  Молекулярно-биологические методы предоставляют информацию о развитии ВПЧ-инфекции, но не позволяют судить о наличии заболевания, поскольку факт инфицирования ВПЧ не всегда сопряжен с заболеванием. Два основных метода диагностики ДНК ВПЧ — полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени и метод гибридного захвата (Digine-тест). Оба метода практически не отличаются по чувствительности и специфичности, однако, сертифицирован и одобрен FDA только Digene-тест.

Digene-тест

Технология Digene-теста основана на гибридном захвате и заключается в уникальном способе связывания вирусной ДНК с РНК-зондом, захвате полученного гибрида моноклональными антителами и хемилюминисцентной детекции образуемых комплексов.

По сути это качественный тест, который применяется для профилактического скрининга для ранней диагностики патологии шейки матки. Тест идентифицует 13 генотипов высокого (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) и 5 генотипов низкого риска (6, 11, 42, 43, 44).

Тест одобрен Федеральной службой РФ по надзору в сфере здравоохранения и социального развития (ФСНСЗСР). Digene-тест выявляет клинически значимый уровень инфицирования вирусом папилломы человека, который приводит к развитию неоплазии шейки матки. Положительный результат теста выдается в единицах Digine. Отрицательный тест практически исключает CIN II и CIN III.

Обнаружение ДНК ВПЧ в качественном формате 

ДНК ВПЧ длительно сохраняется в образцах тканей, поэтому ее легко можно идентифицировать. Для определения достаточно минимального количества исследуемого образца. «Качественное» определение ДНК ВПЧ имеет спорную клиническую значимость, поскольку указывает только на факт наличия вируса, не позволяя сделать прогноз относительно течения инфекции. В большинстве случаев инфекция элиминируется самостоятельно.

Количественное определение вируса ВПЧ

Количественный анализ ДНК ВПЧ наиболее чувствителен на ранних этапах папилломавирусной инфекции, когда отсутствуют другие признаки инфицирования. Например, цитологические, клинические. Метод количественного определения используется в качестве скрининга, особенно в рамках национальных программ контроля рака шейки матки, а также для оценки эффективности терапии. Количественные ПЦР-методы направлены на максимальную чувствительность выявления вирусной ДНК, однако, не всегда существуют прямые клинические корреляции. Одним из критериев клинически значимой инфекции, которая с высокой степенью вероятности способна развиться в неоплазию, рассматривается вирусная нагрузка. Вирусная нагрузка 3 lg на 105 клеток является клинически малозначимой, поскольку сопровождается минимальным риском дисплазии и почти в 100% случаев заканчивается спонтанной регрессией. Вирусная нагрузка больше 5 lg на 105 клеток считается повышенной и сопряжена с высоким риском развития дисплазии. Снижение вирусной нагрузки на 1 lg за 6 месяцев говорит о транзиторной инфекции.  Прогностическая ценность вирусной нагрузки на сегодняшний день однозначно не определена.

Генотипирование вируса

Генотипирование вируса методом ПЦР позволяет определить тип вируса ВПЧ и его онкогенность. Этот метод подходит для выявления персистенции ВПЧ и позволяет отличить случаи реинфекции. О реинфицировании говорит изменение спектра генотипов, о персистентной инфекции — сохранение генотипа вируса через год после первого тестирования. При инфицировании несколькими генотипами ВПЧ одновременно, прогноз течения заболевания менее благоприятный, а риск персистенции и риск развития РШМ по сравнению с инфицированием одним типом более высокий. Выявление ВПЧ высокого риска свидетельствует о наличие папилломавирусной инфекции. ВПЧ высококанцерогенного риска имеют различный онкогенный потенциал. На долю самых опасных, 16 и 18, приходится около 70% всех случаев цервикального рака. Генотипирование на ВПЧ 16 и 18 позволяет выделить группу женщин, которые имеют повышенный риск развития цервикального рака.

Рекомендации ВОЗ по профилактике рака шейки матки

Методы: 

  • основной — цитологический; 
  • дополнительный — ДНК тесты.
  1. Наиболее широкий охват женщин. 
  2. Одноразовый скрининг женщин, 35–40 лет.
  3. Идеальный алгоритм скрининга: 25–65 лет сначала 2 года подряд, при отрицательных результатах каждые 3 года.
  4. Использование ВПЧ-тестирования позволит увеличить промежутки между скринингами до 5 лет.
  5. Использование ВПЧ-тестирования совместно с цитологическим методом: одновременно В качестве первичного метода ВПЧ-тестирование. В качестве вторичного метода — цитология.

Преимущества использования ВПЧ-тестирования

  • ВПЧ-тестировние лучше использовать вместе с цитологическими методами диагностики, так как ВПЧ-тестирование обладает значительно более высокой отрицательной предсказательной ценностью, чем цитология.
  • Анализ ДНК ВПЧ дает более интерпретируемый результат.
  • В меньшей степени зависит от человеческого фактора.
  • Проба для ВПЧ-теста пригодна для анализа дополнительных молекулярных маркёров.

Источник: https://dnkom.ru/o-kompanii/stati/testirovanie-na-vpch/molekulyarno-biologicheskie-metody-diagnostiki-vpch-infektsii/

Врач Юдин
Добавить комментарий